紫外分光光度計已經(jīng)是一種能解決廣泛難題的儀器,從單一波長(cháng)的測量到高性能多光譜的測量分析。實(shí)驗室選擇時(shí)需要根據自己實(shí)驗室的需要和目的用途來(lái)考慮,光學(xué)構造和光源、探測方法和數據處理等都是要考慮的因素。
光學(xué)構造
一般來(lái)說(shuō),紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類(lèi)。顧名思義,單光束型主要是依賴(lài)單束光進(jìn)行測量。一束給定波長(cháng)的光通過(guò)對照物,然后再通過(guò)實(shí)際樣品溶液,就能得到吸光結果。
雙光束型則是將一束光分成兩束,分別測量對照樣品和實(shí)際樣品??梢宰钚』馄坪蜏p少測量時(shí)間。因為增加了測量的速度,所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的研究中大有用處。
光源和檢測方法
分光光度計的光譜也是需要考慮的一個(gè)重要因素。實(shí)驗室研究人員一般希望低價(jià)購入專(zhuān)門(mén)儀器定量核酸、蛋白或者細菌的生長(cháng)情況。如果需要更大的靈活性,研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器,可以程序性地進(jìn)行ELISAs分析和比色分析。
紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長(cháng),通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿(mǎn)足光子學(xué)和半導體研究需要的光譜范圍。
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見(jiàn)光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm)。鎢燈和鹵素燈一般只覆蓋可見(jiàn)光部分(大約380 nm 到800 nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見(jiàn)光區域。
分光光度計的帶寬很大程度上依賴(lài)于單色儀的狹縫的寬度??梢酝渡涑鰧?shí)驗精確要求的光譜。一種嚴格帶寬使得儀器能對復雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿(mǎn)足多種實(shí)驗需要。
為了測量吸光值,分光光度計通常使用光電倍增管和光敏二極管。光電倍增管提供快速的反應時(shí)間和良好的靈敏度,并且可以在紫外光譜調節至特定的范圍。光敏二極管的動(dòng)態(tài)范圍可以在數秒內行使所有的光譜測量。
數據管理
大部分單機型的分光光度計包含了驅動(dòng)儀器運行和管理數據的軟件。高性能的儀器,通常與PC機一起聯(lián)用,同時(shí)用戶(hù)也可以選擇升級軟件以滿(mǎn)足他們的需要。